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核酸提取純化用于體外診斷時(shí)要遵循哪些原則?

更新時(shí)間:2022-08-01      點(diǎn)擊次數(shù):3112
   體外診斷是指在人體之外,通過對(duì)人體樣本(血液、體液、組織等)進(jìn)行檢測(cè)而獲取臨床診斷信息,進(jìn)而判斷疾病或機(jī)體功能的產(chǎn)品和服務(wù)。而檢測(cè)人體樣本的關(guān)鍵步驟之一,即是樣本中的核酸(DNA和RNA)純化。核酸提取純化的方法是影響所提取核酸質(zhì)量的重要因素,只有高質(zhì)量的核酸才能滿足下游的各種應(yīng)用。
  核酸是分子生物學(xué)的基礎(chǔ),而核酸提取是核酸檢測(cè)乃至于整個(gè)分子行業(yè)繞不過去的門檻,很多時(shí)候一份樣本的核酸提取的好壞直接決定了檢測(cè)結(jié)果的有效性。核酸提取為大量廣泛研究和應(yīng)用提供了答案(如克隆、qRT-PCR和全基因組、轉(zhuǎn)錄組范疇中的二代測(cè)序技術(shù)),獲得的核酸可以多種方式進(jìn)行應(yīng)用。
  準(zhǔn)確的研究目的決定了要提取的核酸類型;核酸的應(yīng)用往往影響提取方法的選擇。為確定理想的研究方法,有必要清楚了解核酸的下游應(yīng)用以及任何與樣品類型相關(guān)的潛在限制(如臨床樣品采集量往往有限,核酸提取存在挑戰(zhàn))。
  雖然依據(jù)樣品類型,細(xì)胞裂解方式不同,但整體的核酸提取核心原則不變:細(xì)胞或組織樣品裂解,去除非核酸污染物(蛋白質(zhì)等等)。
  核酸提取純化的主要原則和要求如下:
  1.保證核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性;
  2.排除其它分子的污染(如提取DNA時(shí)排除RNA的干擾);
  3.核酸樣品中不存在對(duì)酶有抑制作用的有機(jī)溶劑和過高濃度的金屬離子;
  4.其它生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子的污染應(yīng)降到低程度;
  5.排除其它核酸分子的污染,如提取DNA分子時(shí)應(yīng)去除RNA,反之亦然。
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